李艳丽，谭维广
1.榆树市动物疫病预防控制中心，吉林榆树 130400；
2.榆树市正阳街道综合服务中心畜牧兽医服务科，吉林榆树 130400
随着科学技术的发展，在畜禽养殖的过程中，为了诊断、预防和控制动物疫病，常常采取实验室检测的方法，而正确的样品采集是实验室检测结果的准确性和有效性的基础。因此，采样人员应当熟练掌握采样工作的程序、采样操作技术以及采样时的注意事项。
1.1 血液
1.1.1 鸡的采血方法：鸡的采血分为心脏采血和鸡翅静脉采血。
鸡心脏采血时，雏鸡采取仰卧保定，采血人员左手抓鸡，右手将针平行颈椎从胸腔前口插入，见回血时即可抽拉针芯，血液流入采血针。成年鸡心脏采血采取侧卧保定，保定人员抓住鸡的两翅和腿，使鸡保持右侧卧的姿势，采血人员于胸骨脊前端至背部下凹处连线的中点处，手触心动特别明显，垂直或稍微前倾下针，刺入2～3 cm，回抽见有回血时即可抽拉针芯使血液进入采血针。若无回血，松开采血针，如果采血针随心脏跳动，表明针扎在了心脏上，需调节针头刺入深度，即可完成采血工作。若采血针不随心脏跳动，则需调整入针角度，直到回抽见血。
鸡翅静脉采血时采取鸡侧卧保定姿势，保定人员将鸡下侧的翅膀压于鸡的身体下方，两手固定头颈和鸡腿，术者于鸡翅内侧中翅与翅根关节处无血管的地方下针，针尖向心端刺入翅静脉丛，见有血液回流，即可把针芯向外拉，直到血液进入采血针。
1.1.2 猪的采血方法：猪采血的方法有耳静脉采血和前腔静脉采血。
猪耳静脉采血时，用锁口器将猪头部固定，保定人员一手捏压猪耳根部静脉的近心端，另一手拍打耳朵上的静脉血管，然后用酒精棉球反复擦拭耳静脉使其怒张，针头向心端延耳静脉血管刺入，见回血缓慢抽拉针芯，也可以用灭菌采血管接血。
猪前腔静脉采血时可以采取站立保定的姿势，用锁口器保定，使猪头部仰起，暴露腋窝，在右侧腋窝处使针尖向心脏方向刺入，见回血即可抽拉针芯，完成采血工作。猪前腔静脉采血时还可以采取仰卧保定的姿势，使猪仰卧，向后方拉直猪的前腿，在胸骨端和耳基部的连线上，胸骨端旁2 cm的凹窝处下针，边刺入边回拉针芯，直到有血液进入抽血针，即可完成了采血工作。
1.1.3 牛、羊的采血方法：牛、羊一般采取颈静脉采血，牛还可以采取尾静脉采血。
牛、羊颈静脉采血时，保定人员固定牛、羊头部，使头稍抬起，颈伸直，在颈部上1/3与中1/3的颈静脉沟处剪毛消毒，采血人员一手拇指压近心端颈静脉使血管怒张，另一只手使针头呈45°角由下向上方刺入颈静脉，让血液延灭菌的采血管壁流入采血管。
牛尾静脉采血时，保定好牛，把牛尾抬高，在距离尾根10 cm左右中点有一个凹陷，采血针垂直刺入约1 cm左右，在针尖刺到尾骨后稍退出一点，抽拉针芯，见回血，即可完成采血工作。
采集血液时，如果需要的是全血，需要在灭菌试管中加入抗凝剂与血液充分混匀。
1.2 组织
1.2.1 猪扁桃体活体采样方法：用专用的扁桃体采集器给猪活体采取扁桃体样品，用开口器打开猪的口腔，采样勾置于凸起的扁桃体上，要快速的扣动扁桃体采集器的扳机，取出扁桃体放在灭菌的离心管中。
1.2.2 淋巴结及内脏：在发生畜禽死亡时，为了查明死亡原因，需要采取病料进行实验室诊断，一般采有病变的脏器和组织，如淋巴结、肝、脾、肾等送往实验室进行检测。淋巴结、内脏的病料采取应在畜禽死亡后立即进行，最晚不超过6 h。根据不同的疾病，采集相应的内脏或内容物，在无法估计是哪种疾病时，可进行全面采集。采集淋巴结、肺、肝、脾脏器时，应采有病变的部位，采1～2 cm3的小方块，分别置于灭菌的离心管内或平皿内。若为病理组织切片所用，应将典型的病变和其相连接的健康组织一并切取，组织块的大小边缘约为2 cm左右，同时避免用金属容器盛载病料，尤其是病料需要染色时，如马传贫、马脑炎、及焦虫病，更应注意。
1.2.3 脑、脊髓：如采取脑、脊髓做病毒检查，可将脑、脊髓侵入50%的甘油盐水中浸泡，或将整个头部切下，用油布包裹，装入木箱或铁通中送检。
1.2.4 皮肤：取大约10 cm2×10 cm2的皮肤一块，置于30%的甘油缓冲液中，或10%的饱和食盐水中。家畜体表或皮内患有疥螨、痒螨时，应选择患病皮肤和健康皮肤交界处，用凸刃小刀，刀刃与皮肤垂直，刮取皮屑，直到皮肤微微出血，此时刮取的皮屑最有检测价值。
1.2.5 肠：用灭菌的刀片将欲采取病料的肠段切一小口，用无菌棉签插入肠内，蘸取肠内容物或肠管黏膜。也可将所欲采取的肠段两端用灭菌线绳结扎，然后将两端切断，置于灭菌器皿内保存。
1.3 牛、羊O-P液
牛、羊在采集O-P液前应禁食12 h，可少量饮水，采样探杯消毒后用与动物体温一致的温水侵泡，将探杯送入食道上不10～15 cm处，轻轻抽动探杯2～3次，然后拉出探杯，取出8～10 mL的O-P液，置于含有等量的细胞培养液的塑料试管内。
1.4 拭子
1.4.1 家禽咽喉拭子和泄殖腔拭子：取无菌棉签，插入鸡喉头或泄殖腔内，旋转3圈，放入灭菌的离心管内，灭菌离心管内要放入含有青链霉素pH值7.2的PBS液。
1.4.2 猪鼻腔拭子、咽拭子：用灭菌棉签沾取猪鼻腔、喉头的分泌物后，将棉签置于含有保存液的无菌离心管内密封保存，保存液同家禽咽喉拭子保存液相同。
1.4.3 脓汁拭子：若为开口的化脓灶，用无菌棉签浸蘸脓汁，置于灭菌的离心管中密封保存。
1.5 胃液和瘤胃内容物
1.5.1 胃液采集：胃液多用有孔的胃管抽取，将胃管送入胃内，外端接在吸引器的负压瓶上，加负压后，胃液自动流出。
1.5.2 瘤胃内容物采集：反刍动物反刍时，食团进入口腔，采样人员及时抓住反刍兽的舌头，另一手探入口腔，即可取得少量的瘤胃内容物。
2.1 采样前的检查
凡发现急性死亡的家畜，包括马、牛、羊和猪，在未剖检采样前应判断是否是炭疽死亡的病畜。炭疽死亡的病畜典型特征是天然孔流煤焦油样血液，血液凝固不良。剖检前样品采集人员可采集病死畜耳尖血做涂片镜检，显微镜下，炭疽杆菌不能运动，成单或成对存在，少数3～5个菌体成链状，每个菌体均有明显的荚膜。在确认病死畜不是因炭疽而死亡的方可剖检采样。
2.2 采样取材时间
内脏病料的采集，须于患畜死亡后立即采集，最好在2 h之内采集，最晚不得超过6 h，特别是在天气炎热的季节，防止死亡时间过长，由肠内侵入其它细菌，尸体易于腐败，不利于病原菌的检出。
2.3 应用器械的消毒
动物样品采集，需在无菌的条件下进行，避免其它外来菌的侵入，保证实验室诊断结果的准确性。因此，采样所需器械，如刀、剪、镊、针等工具一定做好消毒工作，所盛样品的试管、平皿也应消毒，特别是活体采样时，采样部位能消毒的也要做好消毒工作，如畜禽活体采血。总之，采样过程应做到无菌操作。
采取一种样品，使用一套器械与容器，不可用其再采其它脏器材料。
2.4 采样方法的选择要合理
采样方法、采样种类和采样数量的选择应根据采样的目的、内容和要求来确定。不同的疫病，采样的种类不同，但不管是哪种疫病，采集样品时尽量采集具有典型性、代表性、尚未进行治疗和出现典型症状的动物，以便保证检测结果的可靠性和准确性。
2.5 生物安全防护的问题
样品采集人员在样品采集的过程中一定要做好生物安全防护工作，因为很多家畜传染病都是借助人类活动而传播的，特别是人畜共患病，往往因为采样操作不当，造成人感染。因此，在采样的过程中要严格按照生物安全操作的规程进行采样，避免样品对人和环境的污染，造成疫病的传播与流行。
采样的过程中采样人员应穿戴防护用品，不得进食、饮水和吸烟。操作时要严肃认真，手、面部有伤口时，应避免危险操作。
2.6 样品登记编号
样品采集完毕，需将样品编号登记，填好采样单。样品编号需要是连续性的、唯一性的。盛载样品的试管、平皿上的编号要与采样单上的编号一致，并且字迹清晰，不易被擦拭掉和被污染。
2.7 样品的包装和运送
样品种类和来源不同要单独双层包装，包装上要注明样品来源、样品名称、样品数量、样品编号以及采样日期。样品送到兽医实验室的时间应该是越快越好。运送途中要避免样品接触高温和日光，以免样品腐败变质，可以用保温箱，内放冰袋。兽医实验室等检测机构对于样品包装不规范、样品腐败变质、样品数量不足或者组织样品过大、样品编号模糊不清等均可拒绝收样。因此，我们一定要按照样品采集的要求，规范进行样品采集和送检。
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